¿Qué es metodo sanger?

El método Sanger, también conocido como secuenciación de Sanger o secuenciación por terminación de cadenas, es una técnica utilizada para determinar el orden de las bases nucleotídicas en una molécula de ADN. Este método fue desarrollado por Frederick Sanger en la década de 1970 y se convirtió en una herramienta fundamental en la secuenciación del genoma humano.

El método Sanger se basa en la síntesis in vitro de cadenas de ADN complementarias, utilizando dideoxnucleótidos (ddNTP) marcados con diferentes colores. Los ddNTP son análogos de los nucleótidos normales, pero carecen del grupo 3'-OH, lo que significa que una vez incorporados en la cadena en crecimiento, detienen la síntesis de ADN. Esto permite la generación de fragmentos de ADN de diferentes longitudes, que se separan y detectan mediante electroforesis en geles de poliacrilamida, según su tamaño.

En la secuenciación de Sanger, se amplifica la región de interés del ADN mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y luego se divide en cuatro tubos de reacción, cada uno con un ddNTP marcado de un color diferente (ddATP, ddCTP, ddGTP, ddTTP). A medida que se sintetiza la cadena complementaria de ADN, se incorporan aleatoriamente los ddNTP, lo que da como resultado fragmentos de diferentes longitudes y con diferentes colores en cada tubo de reacción. Posteriormente, los fragmentos se separan mediante electroforesis en geles, y se utiliza un detector para leer y registrar el color de cada fragmento en secuencia.

La información de secuencia se obtiene al analizar los resultados de la electroforesis, leyendo el color de los fragmentos generados y determinando la secuencia de nucleótidos. Cada pico de color correspondiente a un fragmento representa una base específica en el ADN original. Al combinar la información de los cuatro tubos de reacción, se obtiene la secuencia completa del ADN original.

El método Sanger ha sido ampliamente utilizado en la secuenciación de genomas completos, así como en estudios de variaciones genéticas y diagnóstico de enfermedades genéticas. Sin embargo, es un método relativamente laborioso y lento en comparación con las técnicas de secuenciación de próxima generación (NGS), que permiten secuenciar múltiples fragmentos de ADN simultáneamente, acelerando el proceso y reduciendo los costos. A pesar de esto, el método Sanger sigue siendo utilizado en investigaciones y aplicaciones clínicas específicas donde se requiere alta precisión y validación de resultados.